Studi precedenti hanno dimostrato che il c-jun e l’ossido nitrico sintasi neurale (nNOS) sono indotti nei motoneuroni danneggiati, ma il loro ruolo nella morte dei motoneuroni rimane poco chiaro.
- Abbiamo ipotizzato che nNOS potrebbe essere un ulteriore effettore della chinasi N-terminale c-jun (JNK) / c-jun nella morte per distacco del motoneurone. Qui abbiamo scoperto che il distacco della radice brachiale ha indotto un aumento transitorio dell’attività di JNK e un aumento di tre e quattro volte rispettivamente di fosfo-c-jun e c-jun; tuttavia, il distacco brachiale ha ridotto l’espressione della proteina nNOS da 4 ore a 14 giorni dopo la lesione.
- A 14 giorni dalla lesione, quasi tutti i motoneuroni nNOS-positivi erano localizzati insieme ai motoneuroni fosfo-c-jun positivi nelle corna addominali omolaterali.
- L’inibitore JNK SP600125, applicato immediatamente dopo la lesione, ha aumentato il livello della proteina nNOS sia nel midollo spinale che nei motoneuroni feriti e ha causato una leggera riduzione della morte dei motoneuroni inibendo la fosforilazione di c-jun 14 giorni dopo la lesione.
- I nostri risultati hanno mostrato che la via di trasduzione del segnale JNK / c-jun è coinvolta nel distacco della radice. L’inibizione della fosforilazione di c-jun impedisce che i livelli di nNOS scendano al di sotto della linea di base nel midollo spinale e mitiga parzialmente la morte del motoneurone dopo l’estrazione della radice.
- Pertanto, l’inibizione della fosforilazione di c-jun o l’aumento del livello della proteina nNOS in un midollo spinale danneggiato in una fase iniziale potrebbero essere utilizzati in futuro come strategie di bersaglio molecolare per prevenire la degenerazione dei motoneuroni durante l’eliminazione delle radici.
La coda C-terminale (CT) dell’ossido nitrico sintasi neuronale (nNOS) è un elemento regolatorio che inibisce l’attività di nNOS in assenza di calmodulina legata (CaM).
Struttura cristallina del dominio nNOS reduttasi (nNOSr) (Garcin, ED, Bruns, CM, Lloyd, SJ, Hosfield, DJ, Tiso, M., Gachhui, R., Stuehr, DJ, Tainer, JA e Getzoff, ED (2004 ) J Biol. Chem. 279, 37918-37927) ha descritto come la prima metà di CT interagisce con nNOSr e ha quindi fornito un modello per uno studio dettagliato. Abbiamo generato mutanti troncati in nNOS e nNOSr per testare l’importanza di 3 diverse regioni CT.
- L’eliminazione della metà terminale di CT (tutti i residui da Ile1413 a Ser1429), che è invisibile nella struttura cristallina, non ha avuto quasi alcun effetto sul rilascio di NADP +, riduzione della flavina, autoossidazione della flavina, riduzione dell’eme, attività reduttasi o NO attività di sintesi, ma ha impedito un aumento della schermatura FMN che normalmente si verifica in risposta al legame NADPH.
- Un’ulteriore rimozione dell’alfa-elica CT (residui da 1401 a 1412) ha aumentato significativamente il tasso di rilascio di NADP +, l’autoossidazione della flavina e l’attività della NADPH ossidasi e ha provocato un’esposizione eccessiva del cofattore FMN. Questi effetti sono stati associati con una maggiore attività della reduttasi e una riduzione leggermente ridotta dell’eme e della sintesi di NO.
- L’ulteriore rimozione dei residui dopo Gly1396 (troncamento CT completo) ha migliorato gli effetti sopra menzionati e ha ulteriormente modificato l’interazione di NADP + con FAD, attenuando la soppressione cinetica della riduzione della flavina e ulteriormente ridotta la riduzione dell’eme e la sintesi di NO.
- I nostri risultati mostrano che la TC esercita effetti sia sfaccettati che regiospecifici sull’attività catalitica e sui comportamenti correlati, fornendo così nuove informazioni sui meccanismi che regolano la catalisi di nNOS.
I domini PDZ sono motivi di interazione proteica multifunzionale che spesso si legano al C-terminale delle proteine bersaglio.
L’ossido nitrico (NO), una molecola di segnalazione endogena, svolge un ruolo chiave nel funzionamento del sistema nervoso, immunitario e cardiovascolare. Sebbene ci siano molte funzioni fisiologiche per l’NO neuronale prodotto principalmente dalla NO sintasi neuronale (nNOS), l’eccessiva attività di nNOS media il danno cerebrale nell’ischemia cerebrale e nei modelli animali del morbo di Parkinson.
Pertanto, la localizzazione subcellulare dell’attività di nNOS deve essere strettamente regolata. Per determinare i ligandi del dominio nNOS PDZ, abbiamo cercato 13 miliardi di peptidi diversi e abbiamo scoperto che il dominio nNOS-PDZ si lega strettamente ai peptidi che terminano in Asp-X-Val. Questo differisce dall’unico consenso noto (Thr / Ser) -X-Val che interagisce con i domini PDZ di PSD-95. La preferenza per Asp in posizione -2 è mediata da Tyr-77 di nNOS. La sostituzione di Y77D78 con H77E78 cambia la specificità del legame da Asp-X-Val a Thr-X-Val. A seguito del consenso di Asp-X-Val, sono state identificate le proteine candidate che interagiscono con nNOS, inclusi i recettori del glutammato e della melatonina. I nostri risultati mostrano che i domini PDZ hanno una chiara specificità di legame peptidico.
L’ossido nitrico sintasi neurale, a differenza delle sue controparti endoteliali e inducibili, mostra un dominio PDZ (PSD-95 / Dlg / ZO-1) situato al suo N-terminale coinvolto nel targeting subcellulare.
Il C-terminale delle varie proteine cellulari si inserisce nel solco di legame di questo dominio PDZ e definisce la distribuzione subcellulare della NOS neuronale (nNOS). I meccanismi molecolari alla base di queste interazioni sono poco conosciuti poiché il dominio nNOS PDZ può sembrare mostrare specificità di legame di classe I, classe II e classe III.
Inoltre , è stato recentemente suggerito che il dominio nNOS PDZ si leghi con un’affinità molto bassa al C-terminale delle proteine bersaglio e che la necessaria interazione laterale concomitante debba avvenire affinché avvenga il legame. Descriviamo qui che un dominio nNOS PDZ può comportarsi come un dominio PDZ di classe III in buona fede e legarsi a sequenze C-terminali con residui acidi nella posizione P-2 con costanti micromolari basse. Può verificarsi anche il legame alle sequenze C-terminali con un residuo idrofobo in P-2 e un residuo acido in P-3 (classe II), sebbene interazioni che coinvolgono residui che si estendono a P-7 mediano questo tipo di legame.
Questo comportamento promiscuo si estende anche alla sua associazione con sequenze di classe I, che devono mostrare un residuo di Glu in P-3 e un residuo di Thr in P-2. Mediante mutagenesi sito-diretta e spettroscopia NMR, siamo stati in grado di identificare i residui coinvolti in ogni tipo specifico di legame e razionalizzare i meccanismi utilizzati per riconoscere i partner vincolanti.
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody |
|||
20-abx103474 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody |
|||
20-abx103475 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody |
|||
20-abx103476 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody |
|||
20-abx103477 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody |
|||
20-abx103478 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody |
|||
20-abx173833 | Abbexa |
|
|
Rat Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E02N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Rat Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E02N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Rat Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E02N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Mouse Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E03N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Mouse Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E03N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Mouse Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E03N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Human Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E01N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Human Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E01N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Human Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E01N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Pig Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E07N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Pig Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E07N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Pig Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E07N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Goat Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E06N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Goat Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E06N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Goat Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E06N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Rabbit Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E04N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Rabbit Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E04N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Rabbit Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E04N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Dog Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E08N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Dog Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E08N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Dog Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E08N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Monkey Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E09N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Monkey Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E09N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Monkey Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E09N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody |
|||
abx122667-100ug | Abbexa | 100 ug | 391 EUR |
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody |
|||
abx025659-400ul | Abbexa | 400 ul | 523 EUR |
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody |
|||
abx025659-80l | Abbexa | 80 µl | 286 EUR |
C-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (CAPON) Antibody |
|||
abx430457-200ul | Abbexa | 200 ul | 384 EUR |
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody |
|||
20-abx302365 | Abbexa |
|
|
Human Neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS) ELISA Kit |
|||
CSB-E13872h-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 165 EUR |
Human Neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS) ELISA Kit |
|||
1-CSB-E13872h | Cusabio |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody Pair |
|||
20-abx370344 | Abbexa |
|
|
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068295 | Abbexa |
|
|
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068296 | Abbexa |
|
|
Mouse Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068297 | Abbexa |
|
|
Mouse Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068298 | Abbexa |
|
|
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068299 | Abbexa |
|
|
Mouse Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068300 | Abbexa |
|
|
Mouse Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068301 | Abbexa |
|
|
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Protein |
|||
20-abx068302 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx274315 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx272743 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx273214 | Abbexa |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal / nNOS (NOS1) Antibody |
|||
20-abx329607 | Abbexa |
|
|
Guinea pig Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E05N0069-192T | BlueGene | 192 tests | 1270 EUR |
Guinea pig Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E05N0069-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 520 EUR |
Guinea pig Neuronal Nitric Oxide Synthase ELISA kit |
|||
E05N0069-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 685 EUR |
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody (HRP) |
|||
20-abx317052 | Abbexa |
|
|
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody (FITC) |
|||
20-abx317053 | Abbexa |
|
|
Carboxyl-Terminal PDZ Ligand of Neuronal Nitric Oxide Synthase Protein (NOS1AP) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx317054 | Abbexa |
|
|
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1)CLIA Kit |
|||
SCA815Hu-10x96wellstestplate | Cloud-Clone | 10x96-wells test plate | 5647.8 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1)CLIA Kit |
|||
SCA815Hu-1x48wellstestplate | Cloud-Clone | 1x48-wells test plate | 552.76 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1)CLIA Kit |
|||
SCA815Hu-1x96wellstestplate | Cloud-Clone | 1x96-wells test plate | 746.8 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1)CLIA Kit |
|||
SCA815Hu-5x96wellstestplate | Cloud-Clone | 5x96-wells test plate | 3060.6 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) CLIA Kit |
|||
4-SCA815Hu | Cloud-Clone |
|
|
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Hu-10x96wellstestplate | Cloud-Clone | 10x96-wells test plate | 4273.35 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Hu-1x48wellstestplate | Cloud-Clone | 1x48-wells test plate | 439.57 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Hu-1x96wellstestplate | Cloud-Clone | 1x96-wells test plate | 585.1 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Hu-5x96wellstestplate | Cloud-Clone | 5x96-wells test plate | 2332.95 EUR |
Human Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
4-SEA815Hu | Cloud-Clone |
|
|
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Ra-10x96wellstestplate | Cloud-Clone | 10x96-wells test plate | 4626.78 EUR |
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Ra-1x48wellstestplate | Cloud-Clone | 1x48-wells test plate | 468.68 EUR |
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Ra-1x96wellstestplate | Cloud-Clone | 1x96-wells test plate | 626.68 EUR |
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
SEA815Ra-5x96wellstestplate | Cloud-Clone | 5x96-wells test plate | 2520.06 EUR |
Rat Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) ELISA Kit |
|||
4-SEA815Ra | Cloud-Clone |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Polyclonal Antibody (Human) |
|||
4-PAA815Hu01 | Cloud-Clone |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Polyclonal Antibody (Mouse) |
|||
4-PAA815Mu01 | Cloud-Clone |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Polyclonal Antibody (Mouse) |
|||
4-PAA815Mu02 | Cloud-Clone |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Polyclonal Antibody (Mouse) |
|||
4-PAA815Mu03 | Cloud-Clone |
|
|
Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal (NOS1) Polyclonal Antibody (Rat) |
|||
4-PAA815Ra03 | Cloud-Clone |
|
|
Mouse Neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS/NOS1) ELISA Kit |
|||
CSB-E13273m-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 165 EUR |
Mouse Neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS/NOS1) ELISA Kit |
|||
1-CSB-E13273m | Cusabio |
|
|
Rat Neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS/NOS1) ELISA Kit |
|||
CSB-E14034r-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 165 EUR |
Rat Neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS/NOS1) ELISA Kit |
|||
1-CSB-E14034r | Cusabio |
|
|
Rat neuronal nitric oxide synthase(NOS,nNOS)ELISA Kit |
|||
GA-E0550RT-48T | GenAsia Biotech | 48T | 317 EUR |
Rat neuronal nitric oxide synthase(NOS,nNOS)ELISA Kit |
|||
GA-E0550RT-96T | GenAsia Biotech | 96T | 496 EUR |
Infine, abbiamo analizzato l’associazione ad alta affinità del dominio nNOS PDZ con Claudin-3 e Claudin-14, due proteine di membrana tetraspan strettamente collegate che sono componenti essenziali della barriera paracellulare.