Un anticorpo monoclonale prodotto contro un peptide sintetico di ossitocina colora i neuroni ipotalamici del topo

Un anticorpo monoclonale contro l’ossitocina è stato generato in cellule di ibridoma 7a5 derivate da cellule di mieloma e linfociti dalla milza di topi immunizzati con un peptide sintetico di ossitocina. L’anticorpo monoclonale 7a5 si lega all’ossitocina nei saggi di immunoassorbimento enzimatico. Il mezzo di crescita cellulare 7a5 è stato diluito fino a 5.000 volte e utilizzato per l’immunoistochimica.

In primo luogo, per testare la specificità dell’anticorpo 7a5 contro l’ossitocina, abbiamo colorato i tessuti cerebrali di topi knockout per l’ossitocina, topi, in cui viene eliminato il primo esone del gene dell’ossitocina-neurofisina. Nessuna immunoreattività 7a5 è stata rilevata nei nuclei paraventricolari (PVN) dell’ipotalamo di topi knockout per l’ossitocina; tuttavia, quest’area è stata fortemente colorata con l’anticorpo policlonale anti-vasopressina, HM07. I preparati tissutali di PVN di topo wild-type e nuclei sovraottici (SON) hanno mostrato un’immunoreattività 7a5 che era indistinguibile dalla colorazione prodotta con un anticorpo policlonale anti-ossitocina, HM06.

L’immunoreattività HM06 nel PVN era simile a quella di un anticorpo monoclonale anti-ossitocina, PS38. Abbiamo quindi esaminato la reattività crociata di 7a5 con arginina-vasopressina. La maggior parte del soma cellulare e dei processi colorati con 7a5 non sono stati colorati insieme all’anticorpo della vasopressina nelle regioni SON e PVN. Inoltre, il nucleo soprachiasmatico è stato colorato dall’anticorpo vasopressina ma non da 7a5. Questi risultati dimostrano che 7a5 è un nuovo anticorpo monoclonale anti-ossitocina che riconosce l’ossitocina e non la vasopressina; pertanto, 7a5 può essere utilizzato per studiare il ruolo dell’ossitocina nel cervello.

Una sonda chimica fluorescente CDy9 colora selettivamente  e consente l’isolamento di  cellule staminali embrionali di topo  ingenue vive  .

• Le cellule staminali embrionali (ESC) umane e di topo differiscono in termini di stato di pluripotenza, ovvero naïve rispetto a innescate. Ciò influisce su varie proprietà biologiche e porta a diversi ostacoli tecnici per future applicazioni cliniche, come difficoltà nella formazione di chimere, passaggio unicellulare e modifica genica.
• In termini di generazione di tessuti e organi umani funzionali attraverso il chimerismo interspecie di mammiferi, una sonda chimica fluorescente che etichetta specificamente le ESC ingenue aiuterebbe a isolare queste cellule e monitorarne la conversione . Questo studio dimostra che il composto della sonda chimica fluorescente di designazione giallo 9 (CDy9) colora selettivamente ESC di topo (mESC) ingenui, ma non innescati.
• CDy9 è entrato nelle cellule tramite Slc13a5, un trasportatore di membrana altamente espresso nelle mESC ingenue. L’ordinamento cellulare basato sulla fluorescenza basato sulla colorazione CDy9 ha separato con successo mESC ingenui da mESC innescati. I topi generati utilizzando cellule CDy9+ isolate durante la conversione di cellule staminali epiblastiche di topo in mESC ingenue hanno mostrato un chimerismo del colore del mantello.
• Inoltre, CDy9 ha colorato in modo specifico le cellule nella massa cellulare interna degli embrioni di topo. Questi risultati suggeriscono che CDy9 è uno strumento utile per isolare mESC naïve funzionali.
• Studi immunoistochimici hanno dimostrato che la E-caderina è espressa nei carcinomi mammari che mostrano un’istologia duttale, con una corrispondente perdita di espressione nei tumori con istologia lobulare. Di conseguenza, l’anti-caderina monoclonale murina [HECD-1] è stata utilizzata dai patologi per differenziare tra carcinomi duttali e lobulari, con tassi di sensibilità e specificità attualmente pubblicati di circa il 90%. Gli anticorpi monoclonali di coniglio possono combinare le migliori proprietà sia degli anticorpi monoclonali di topo che degli antisieri di coniglio.
• Pertanto, questo studio confronta la sensibilità alla colorazione e la specificità di una nuova caderina E monoclonale di coniglio e la caderina E monoclonale di topo standard [HECD-1] nei carcinomi duttali mammari e valuta un cocktail di caderina E monoclonale di coniglio e catenina p120 in la discriminazione dei carcinomi duttali da quelli lobulari. La caderina E di coniglio ha mostrato una colorazione più nitida e una maggiore sensibilità (80/81, 99%) rispetto alla caderina E di topo (75/81, 93%). La caderina E di coniglio ha ottenuto un punteggio di 3+ ​​nell’85,2% (69/81) dei casi rispetto a 3+ solo nel 21,0% (17/81) dei casi colorati con caderina E di topo.
• Tutti i carcinomi lobulari (n=37) sono stati confermati dall’assenza di E-caderina e dall’espressione citoplasmatica diffusa della catenina p120. Sebbene sia la E-caderina di topo che la doppia colorazione possano differenziare le lesioni duttali da quelle lobulari, la doppia colorazione è utile nei casi difficili a causa della sua colorazione rosa brillante con catenina p120 e della colorazione E-caderina di coniglio marrone scuro. L’anticorpo altamente sensibile della caderina E del coniglio è l’anticorpo preferito per la valutazione dei carcinomi duttali e per distinguere le lesioni duttali rispetto a quelle lobulari e la doppia colorazione era superiore alla singola colorazione della caderina E.

Le rispettive storie di vita di soggetti umani e topi sono ben definite e descrivono una storia unica di conservazione evolutiva che si estende dall’identità di sequenza all’interno del genoma alle basi dei percorsi biochimici, cellulari e fisiologici.

Di conseguenza, i lignaggi ematopoietici di entrambe le specie vengono mantenuti invariantemente, ciascuno con eosinofili identificabili. Questa presenza canonica, tuttavia, non preclude le disparità tra gli eosinofili umani e di topo, le loro funzioni effettrici o entrambe. In effetti, molti libri e recensioni evidenziano dogmaticamente le differenze, fornendo una logica per scartare l’uso di modelli murini di malattie eosinofile umane.

Suggeriamo che questa prospettiva sia campanilistica e ignori la ricchezza di studi disponibili e il consenso della letteratura sull’esistenza di somiglianze schiaccianti (e non differenze) tra eosinofili umani e di topo. L’obiettivo di questa recensione è riassumere questa letteratura e in alcuni casi fornire dettagli sperimentali confrontando e contrastando le funzioni degli effettori degli eosinofili e degli eosinofili nei soggetti umani rispetto ai topi. In particolare, la nostra recensione fornirà una sintesi e una guida di riferimento di facile utilizzo per importanti studi che dimostrano che sebbene esistano differenze, il più delle volte le loro conseguenze sono sconosciute e non riflettono necessariamente disparità intrinseche nella funzione degli eosinofili, ma invece specie- variazioni specifiche.

La conclusione di questa panoramica è che, nonostante le differenze nominali, le vaste somiglianze tra gli eosinofili umani e di topo forniscono importanti informazioni sui loro ruoli nella salute e nella malattia e, a loro volta, dimostrano l’utilità unica degli studi sui topi con un’aspettativa di estrapolazione valida alla comprensione e al trattamento dei pazienti.

Niemann-Pick tipo C (NPC) è una malattia neurodegenerativa caratterizzata da un progressivo accumulo di colesterolo, gangliosidi e altri lipidi nel sistema nervoso centrale e negli organi viscerali.

Nel modello murino NPC1, la neurodegenerazione e la perdita di cellule neuronali si verificano prima del giorno 21 postnatale. Non è stato dimostrato se l’accumulo di colesterolo neuronale si verifica in vivo prima dei primi segni di perdita di cellule neuronali. In questo rapporto, abbiamo utilizzato il modello murino NPC1 e impiegato un nuovo reagente di legame del colesterolo, BC theta, che ci ha permesso di visualizzare l’accumulo di colesterolo cellulare a un livello precedentemente irraggiungibile.

I risultati dimostrano la superiorità della colorazione BC theta rispetto alla tradizionale colorazione filipina nella microscopia confocale ed evidenziano diverse nuove scoperte. Mostriamo che al giorno 9 postnatale, sebbene siano rilevabili solo lievi segni di neurodegenerazione, si è già verificato un significativo accumulo di colesterolo neuronale in tutto il cervello NPC1. Inoltre, sebbene i neuroni di Purkinje NPC1 mostrino una morfologia normale al giorno 9, si è verificato un significativo accumulo di colesterolo all’interno dei loro estesi alberi dendritici.

Human MYC Associated Factor X (MAX) ELISA Kit
RDR-MAX-Hu-48Tests	Reddot Biotech	48 Tests	544 EUR
Human MYC Associated Factor X (MAX) ELISA Kit
RDR-MAX-Hu-96Tests	Reddot Biotech	96 Tests	756 EUR
pUC57 Simple Plasmid
PVT0006	Lifescience Market	2 ug	325 EUR
pMD- 19T (Simple)
PVT0016	Lifescience Market	2 ug	266 EUR
Po (P-Zero)
CH23009	Neuromics	100 ul	179 EUR
T1 Simple Cloning Kit
20-abx098056	Abbexa	495.00 EUR 662.00 EUR	20 rxns 60 rxns
Blunt Simple Cloning Kit
20-abx098060	Abbexa	495.00 EUR 662.00 EUR	20 rxns 60 rxns
pUC57 Simple-PVT1 Plasmid
PVTB00511	Lifescience Market	2 ug	356 EUR
pUC57 Simple-Pdcd4 Plasmid
PVTB70003	Lifescience Market	2 ug	356 EUR
pUC57- Simple- gRNA backbone
PVT11371	Lifescience Market	2 ug	301 EUR
Mouse Protein max (MAX) ELISA Kit
abx512853-96tests	Abbexa	96 tests	668 EUR
MAX Protein Vector (Mouse) (pPB-N-His)
PV199491	ABM	500 ng	603 EUR
MAX Protein Vector (Mouse) (pPB-N-His)
PV199495	ABM	500 ng	603 EUR
Pig porcine Cadherin-2/N-Cadherin PicoKine™ ELISA Kit
EK0669-PO	BosterBio	96 wells	425 EUR
ELISA kit for Mouse Protein max (MAX)
KTE71108-48T	Abbkine	48T	332 EUR
ELISA kit for Mouse Protein max (MAX)
KTE71108-5platesof96wells	Abbkine	5 plates of 96 wells	2115 EUR
ELISA kit for Mouse Protein max (MAX)
KTE71108-96T	Abbkine	96T	539 EUR
Protein Max (MAX) Antibody
abx117235-100ug	Abbexa	100 ug	467 EUR
Protein Max (MAX) Antibody
20-abx123505	Abbexa	411.00 EUR 592.00 EUR 182.00 EUR 314.00 EUR	100 ul 200 ul 20 ul 50 ul
Protein Max (MAX) Antibody
20-abx312892	Abbexa	411.00 EUR 1845.00 EUR 599.00 EUR 182.00 EUR 300.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
Protein Max (MAX) Antibody
20-abx001769	Abbexa	411.00 EUR 592.00 EUR 182.00 EUR 314.00 EUR	100 ul 200 ul 20 ul 50 ul
Protein Max (Max) Antibody
abx146651-100ug	Abbexa	100 ug	439 EUR
Protein Max (MAX) Antibody
abx431420-200ul	Abbexa	200 ul	384 EUR
Protein Max (MAX) Protein
20-abx260587	Abbexa	2861.00 EUR 328.00 EUR 230.00 EUR	1 mg 25 ug 5 ug
Protein Max (MAX) Antibody
abx235033-100ug	Abbexa	100 ug	481 EUR
Giemsa stain
GB0477	Bio Basic	10g	60.44 EUR
Jenner's Stain
GT5545-100G	Glentham Life Sciences	100 g	160 EUR
Jenner's Stain
GT5545-25G	Glentham Life Sciences	25 g	81 EUR
Giemsa Stain
GT6821-100ML	Glentham Life Sciences	100 ml	46 EUR
Giemsa Stain
GT6821-250ML	Glentham Life Sciences	250 ml	59 EUR
Wright's stain
GT7819-100G	Glentham Life Sciences	100 g	110 EUR
Wright's stain
GT7819-10G	Glentham Life Sciences	10 g	46 EUR
Wright's stain
GT7819-250G	Glentham Life Sciences	250 g	190 EUR
Wright's stain
GT7819-25G	Glentham Life Sciences	25 g	58 EUR
Giemsa stain
20-abx082069	Abbexa	175.00 EUR 217.00 EUR	1 g 5 g
Giemsa stain
20-abx082518	Abbexa	175.00 EUR 217.00 EUR	1 g 5 g
DiI Stain
B2742-250	Biovision	250 mg	753 EUR
DiI Stain
B2742-50	Biovision	50 mg	227 EUR
Fmoc-Ser(PO(OBzl)OH)-OH
B-3455.0001	Bachem	1.0g	297 EUR
Fmoc-Ser(PO(OBzl)OH)-OH
B-3455.0005	Bachem	5.0g	1093 EUR
Fmoc-Thr(PO(OBzl)OH)-OH
B-3460.0001	Bachem	1.0g	321 EUR
Fmoc-Thr(PO(OBzl)OH)-OH
B-3460.0005	Bachem	5.0g	1192 EUR
Fmoc-Tyr(PO(OBzl)OH)-OH
B-3565.0001	Bachem	1.0g	345 EUR
Fmoc-Tyr(PO(OBzl)OH)-OH
B-3565.0005	Bachem	5.0g	1288 EUR
Fish phenol oxidase (PO) ELISA Kit
QY-E160047	Qayee Biotechnology	96T	478 EUR
N-Acetylglucosamine
NAG15-N	Alpha Diagnostics	1 g	286 EUR
MAX Recombinant Protein (Mouse)
RP149615	ABM	100 ug	Ask for price
MAX Recombinant Protein (Mouse)
RP149618	ABM	100 ug	Ask for price
Protein Max (MAX) Antibody (HRP)
20-abx312893	Abbexa	411.00 EUR 1845.00 EUR 599.00 EUR 182.00 EUR 300.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
Protein Max (MAX) Antibody (FITC)
20-abx312894	Abbexa	411.00 EUR 1845.00 EUR 599.00 EUR 182.00 EUR 300.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
Protein Max (MAX) Antibody (Biotin)
20-abx312895	Abbexa	411.00 EUR 1845.00 EUR 599.00 EUR 182.00 EUR 300.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
PACAP ELISA Kit| Mouse Pituitary Adenylate Cyclase Activating Po
EF013805	Lifescience Market	96 Tests	689 EUR
(R)-2-N-Boc-Aminomethylpyrrolidine
abx188024-100g	Abbexa	100 g	1776 EUR
(R)-(+)-N-Benzyl-1-phenylethylamine
abx185681-100g	Abbexa	100 g	314 EUR
Protein Stain-EZ C, Reversible Copper Stain Kit
BSP017	Bio Basic	1kit, 10prep	74.36 EUR
Protein Stain-EZ B, Reversible Zinc Stain Kit
BSP019	Bio Basic	1kit, 10prep	74.36 EUR
Protein Stain-EZG Rapid Coomassie Blue Stain Solution
BSP041	Bio Basic	1KIT, 10prep	76.1 EUR
4CN Stain Kit
PW024	Bio Basic	5Preps, 5prep	70.88 EUR
TMB Stain Kit
PW025	Bio Basic	5Preps, 5prep	70.88 EUR
Jenner's Stain, certified
GT1148-25G	Glentham Life Sciences	25 g	107 EUR
Giemsa stain, powder
GT7801-100G	Glentham Life Sciences	100 g	134 EUR
Giemsa stain, powder
GT7801-10G	Glentham Life Sciences	10 g	46 EUR
Giemsa stain, powder
GT7801-25G	Glentham Life Sciences	25 g	62 EUR
Giemsa stain, powder
GT7801-50G	Glentham Life Sciences	50 g	86 EUR
Giemsa stain, powder
GT7801-5G	Glentham Life Sciences	5 g	42 EUR
ClearSight DNA Stain
BH40501	Bioatlas	1ml	103 EUR
ClearSight RNA Stain
BH40601	Bioatlas	400µl	77 EUR
Silver Stain kit
AR0171	BosterBio	1 kit (for 30 assays to stain the gel of 5 X8.5)	152 EUR
Fite's Stain Kit
FLS-1	ScyTek Laboratories	125 ml ea.	149 EUR
Fite's Stain Kit
FLS-500	ScyTek Laboratories	500 ml ea.	295 EUR
Trichrome Stain (Blue)
TGB125	ScyTek Laboratories	125 ml	74 EUR
Trichrome Stain (Blue)
TGB500	ScyTek Laboratories	500 ml	116 EUR
Trichrome Stain (Blue)
TGB999	ScyTek Laboratories	1000 ml	143 EUR
Pneumocystis Stain Kit
PCS-1	ScyTek Laboratories	1 kit(s)	156 EUR
Pneumocystis Stain Kit
PCS-2	ScyTek Laboratories	100 Slides	104 EUR
Reticulum Stain Kit
GRT-1	ScyTek Laboratories	1 kit(s)	255 EUR
Reticulum Stain Kit
GRT-2	ScyTek Laboratories	1 kit(s)	152 EUR
Gram Stain Kit
GSK-1	ScyTek Laboratories	125 ml ea.	125 EUR
Gram Stain Kit
GSK-2	ScyTek Laboratories	30 ml ea.	92 EUR
Gram Stain Kit
GSK-500	ScyTek Laboratories	500 ml ea.	303 EUR
Iron Stain Kit
IRN-1	ScyTek Laboratories	1 kit(s)	149 EUR
Iron Stain Kit
IRN-2	ScyTek Laboratories	100 Slides	101 EUR

Mostriamo anche che nel talamo e nella corteccia dei topi NPC1, le cellule gliali attivate compaiono per la prima volta al giorno 9 postnatale e si popolano pesantemente entro il giorno 22, suggerendo che nei topi NPC1, l’accumulo di colesterolo neuronale precede il danno neuronale e la perdita di cellule neuronali.