Effetti neuroprotettivi degli oligomeri di procianidina di cannella di tipo B sull’apoptosi indotta da MPP + in un modello di coltura cellulare del morbo di Parkinson

Towards a Cardoon ( Cynara cardunculus var. altilis ) – Bioraffineria basata su: un caso di studio di colture cellulari migliorate tramite la modulazione genetica della via del fenilpropanoide

Il cardo coltivato ( Cynara cardunculus var. altilis L.) è una promettente specie candidata per lo sviluppo di colture cellulari vegetali adatte alla produzione di biomassa su larga scala e al recupero di nutraceutici. Abbiamo messo a punto un protocollo per la trasformazione mediata da Agrobacterium tumefaciens , che può essere utilizzato per il miglioramento delle colture cellulari di cardo in una struttura di bioraffineria.

Poiché un alto contenuto di lignina determina rese di saccarificazione inferiori per la biomassa, si è optato per un approccio biotecnologico, con lo scopo di ridurre il contenuto di lignina; abbiamo generato linee transgeniche che sovraesprimono il fattore di trascrizione Arabidopsis thaliana MYB4, un noto repressore della biosintesi di lignina/flavonoidi.

Qui, riportiamo una caratterizzazione completa, comprese le analisi metaboliche e trascrittomiche delle linee di cardo di sovraespressione AtMYB4 , rispetto al tipo selvatico, sottolineando i tratti favorevoli per il loro uso in bioraffineria. Tra questi, la migliore accessibilità della biomassa lignocellulosica agli enzimi degradanti a causa dell’esaurimento del contenuto di lignina, l’inaspettato aumento dei tassi di crescita e i preziosi profili nutraceutici, in particolare per i profili idrossicinnamico/caffeilchinico e degli acidi grassi.

Approcci endpoint e cinetici per valutare l’efficacia della trasfezione nella coltura cellulare di mammifero

L’efficacia dei reagenti di trasfezione e delle nanoparticelle viene spesso valutata misurando i livelli di proteina reporter espressa. I test basati su fluorescenza e luminescenza forniscono approcci sensibili, quantificabili e ripetibili. I geni che esprimono la proteina reporter possono essere integrati nelle cellule per creare linee cellulari reporter stabili o possono essere espressi da un plasmide trasfettato.

La proteina fluorescente verde, la luciferasi e la fosfatasi alcalina secreta sono reporter affermati con applicazioni versatili. Il monitoraggio dei cambiamenti nelle cellule vive durante e dopo la trasfezione offre opportunità per rivelare meccanismi correlati, efficacia e colli di bottiglia della trasfezione. In questo capitolo, descriviamo l’impostazione sperimentale e le considerazioni per lo screening in vitro dei vettori di consegna. Questo può essere ulteriormente esteso alle misurazioni nelle linee cellulari reporter.

Le colture miste di cellule dendritiche allogeniche sono fenotipicamente e funzionalmente stabili – un potenziale per la generazione di prodotti “off the shelf” basati su cellule primarie

La vaccinazione contro i tumori mediante vaccini a cellule dendritiche pulsate con antigene (DC) si è notevolmente evoluta nell’ultimo decennio, con centinaia di sperimentazioni cliniche umane attive a buon punto. L’uso di una fonte autologa per terapie vaccinali basate su DC rimane la scelta ovvia nella maggior parte degli studi clinici; Tuttavia, nuove prove suggeriscono che una fonte allogenica di DC può avere successo se somministrata nel giusto contesto.

Una delle sfide che devono affrontare i protocolli di vaccinazione DC di successo è la generazione di un numero sufficientemente grande di DC destinati alla vaccinazione e la standardizzazione di queste procedure. Inoltre, le variazioni nella qualità dei vaccini DC dovute alla variazione da donatore a donatore rappresentano un importante fattore terapeutico.

Fino ad oggi non è stato dimostrato se DC di diversi donatori possano coesistere prontamente all’interno della stessa co-coltura per i lunghi periodi richiesti per la produzione del vaccino. Dimostriamo che la generazione di co-colture DC allogeniche, generate da più donatori non imparentati, consente la conservazione delle loro proprietà fenotipiche e funzionali in vitro fino a 72 ore.

Pertanto, nel caso di un approccio vaccinale allogenico, si potrebbe garantire un gran numero di DC generati da una fonte cellulare primaria destinata a vaccinazioni multiple. Generando grandi quantità di DC fabbricate ex vivo da più donatori, ciò rappresenterebbe la possibilità di garantire quantità sufficienti di prodotto equipotente “pronto all’uso” che potrebbe ad es. essere utilizzato per un’intera coorte di pazienti all’interno di uno studio.

Sistemi di coltura in vitro tridimensionali nella scoperta di farmaci antitumorali mirati alle cellule staminali del cancro