Variazione indotta da stimolatori chimici nella biomassa cellulare, biosintesi di prodotti cellulari secondari e sistema antiossidante nelle colture di calli di Fagonia indica

La Fagonia indica è una ricca fonte di composti farmacologicamente attivi. La variazione dei metaboliti di interesse è uno dei maggiori problemi nelle piante selvatiche a causa di diversi fattori ambientali. L’aggiunta di elicitori chimici è una delle strategie efficaci per innescare le vie biosintetiche per il rilascio di una maggiore quantità di composti bioattivi. Pertanto, questo studio è stato progettato per indagare gli effetti di elicitori chimici, cloruro di alluminio (AlCl ) e cloruro di cadmio (CdCl ), sulla biosintesi di metaboliti secondari, biomassa , e il sistema antiossidante nelle colture di calli di F. indica .

Tra i vari trattamenti applicati, AlCl (concentrazione 0,1 mM) ha migliorato il più alto accumulo di biomassa (peso fresco (FW): 404,72 g / L) rispetto al controllo (FW: 269,85 g / L ). L’esposizione delle colture ad AlCl (0,01 mM) ha potenziato l’accumulo di metaboliti secondari e il contenuto fenolico totale (TPC: 7,74 mg/g DW) e il contenuto totale di flavonoidi (TFC: 1,07 mg/g). .) DW) erano superiori a quelli di colture esposte a CdCl (0.01 mM) con livelli di contenuto (TPC: 5,60 e TFC: 0,97 mg / g) rispetto al controllo (TPC: 4,16 e TFC: 0,42 mg / g DW).

 

Allo stesso modo, AlCl e CdCl hanno anche promosso l’attività di scavenging dei radicali liberi (FRSA; 89,4% e 90%, rispettivamente) a una concentrazione di 0,01 mM, rispetto al controllo (65,48%). Ad esempio, la quantificazione dei metaboliti tramite cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) ha rivelato una produzione ottimale di miricetina (1,20 mg/g), apigenina (0,83 mg/g), isorhamnetina (0,70 mg/g) e kaempferolo (0,64 mg). / G). Colture coltivate in presenza di AlCl hanno innescato quantità maggiori di metaboliti secondari rispetto a quelle coltivate in presenza di CdCl (0,79, 0,74, 0,57 e 0,67 mg/g) .

 

Inoltre, AlCl a 0,1 mM ha potenziato la biosintesi della superossido dismutasi (SOD: 0,08 nM/min/mg-FW) e degli enzimi perossidasi (POD: 2,37 nM/min/mg-FW), mentre CdCl ha determinato un’attività SOD fino a 0,06 nM/min/mg-FW e POD: 2,72 nM/min/mg-FW. Da questi risultati, è chiaro che AlCl è un elicitore migliore in termini di produttività più elevata e uniforme di biomassa, prodotti cellulari secondari ed enzimi antiossidanti rispetto a CdCl . ed il controllo. È possibile ridimensionare l’attuale strategia ad un bioreattore per una maggiore produttività di metaboliti di interesse per diverse industrie farmaceutiche.

 

Ciprofloxacina e levofloxacina come potenziali farmaci nel trattamento del cancro genito-urinario: l’effetto della dose-risposta su colture cellulari 2D e 3D

 

Introduzione: L’introduzione di nuovi farmaci per l’applicazione clinica è un processo molto difficile, lungo, lungo e costoso, motivo per cui il riposizionamento dei farmaci sta acquisendo sempre più importanza. Lo scopo di questo studio era di analizzare le proprietà citotossiche di ciprofloxacina e levofloxacina su linee cellulari di vescica e prostata in vitro.
Metodi: In questo studio sono state utilizzate linee cellulari di cancro alla vescica e alla prostata insieme alle loro controparti non maligne. Per valutare l’effetto citotossico di entrambi i farmaci sulle linee cellulari testate, sono stati esaminati il test MTT, l’analisi della crescita cellulare in tempo reale, il rilevamento dell’apoptosi, i cambiamenti del ciclo cellulare, l’analisi molecolare e le colture 3D.
Risultati: Entrambi i fluorochinoloni hanno mostrato un effetto tossico su tutte le linee cellulari testate. Nel caso di linee cellulari non maligne, l’effetto citotossico è stato più debole, il che è stato particolarmente pronunciato nella linea cellulare della vescica.
Un confronto di entrambi i fluorochinoloni ha mostrato il vantaggio della ciprofloxacina (dosi più basse del farmaco hanno causato un effetto citotossico più forte). Entrambi i fluorochinoloni hanno determinato un aumento delle cellule apoptotiche tardive e un’inibizione del ciclo cellulare principalmente nella fase S. L’analisi molecolare ha mostrato cambiamenti nell’espressione di BAX BCL2 TP53 CDKN1 nelle linee cellulari testate dopo l’incubazione con ciprofloxacina e levofloxacina. È stata notata la downregulation dei geni della topoisomerasi II ( TOP2A TOP2B ). L’analisi tridimensionale (3D) della coltura cellulare ha confermato il maggiore effetto citotossico del fluorochinolone testato contro le linee cellulari del cancro.
Conclusioni: I nostri risultati suggeriscono che sia la ciprofloxacina che la levofloxacina possono avere un grande potenziale, specialmente nella terapia di supporto del trattamento del cancro della vescica. Tenendo conto dei bassi costi di tale terapia, i fluorochinoloni sembrano essere i candidati ideali per il riposizionamento nelle terapie per il cancro della vescica.

Dalla coltura MSC primaria del tessuto adiposo alla linea cellulare immortalizzata che produce citochine per un potenziale uso nella terapia di medicina rigenerativa o nell’immunoterapia

 

Per venticinque anni sono stati fatti tentativi per utilizzare le MSC nel trattamento di varie malattie grazie alle loro proprietà rigenerative e immunomodulatorie. Tuttavia, i risultati non sono soddisfacenti. Supponendo che le MSC possano essere sostituite in alcune terapie dai fattori attivi che producono, la linea di MSC immortalizzate è stata istituita dal tessuto adiposo umano (HATMSC1) per produrre terreni condizionati e testare il suo potenziale rigenerativo in vitro in termini di possibile applicazione clinica.

La produzione di fattori biologicamente attivi da parte delle MSC primarie era inferiore rispetto alla linea cellulare HATMSC1 e diversi fattori sono stati prodotti solo dalla linea cellulare. È stato dimostrato che un mezzo condizionato da HATMSC1 aumenta la proliferazione di vari tipi di cellule, aumenta l’adesione delle cellule e migliora la funzione delle cellule endoteliali. È stato scoperto che l’ipossia durante la coltura determinava un aumento della produzione di fattori pro-angiogenici, come VEGF, IL-8, angiogenina e MCP-1.

 

I fattori immunomodulatori hanno causato un aumento della produzione di GM-CSF, IL-5, IL-6, MCP-1, RANTES e IL-8. Questi dati suggeriscono che questi fattori, prodotti in diverse condizioni di coltura, potrebbero essere utilizzati per diverse condizioni mediche, come nella medicina rigenerativa, quando può essere utile una maggiore concentrazione di fattori pro-angiogenici, o nelle malattie infiammatorie con terreni condizionati ad alto concentrazione di fattori immunomodulatori.

Differenziazione dei fibroblasti e rimodellamento della matrice compromessa dalla microgravità simulata nel modello di coltura cellulare 3D

L’esposizione alla microgravità influisce negativamente sulla salute degli astronauti. Tuttavia, si sa meno sulla misura in cui la differenziazione dei fibroblasti durante il processo di guarigione della ferita è influenzata dalla mancanza di gravità. Uno dei passaggi chiave di questo processo è la differenziazione dei fibroblasti in miofibroblasti, che contribuiscono funzionalmente attraverso la produzione e il rimodellamento della matrice extracellulare.

In questo lavoro, abbiamo utilizzato matrici tridimensionali (3D) a base di collagene per imitare il tessuto interstiziale e studiato la differenziazione dei fibroblasti in condizioni di microgravità simulata (µG). I nostri risultati hanno dimostrato che l’espressione di alfa-actina muscolare liscia (αSMA) e la traslocazione di Smad2 / 3 nel nucleo cellulare sono state ridotte dopo l’esposizione a sµG rispetto al controllo 1 , il che suggerisce la compromissione della differenziazione dei fibroblasti sotto sµG.

 

Inoltre, il rimodellamento della matrice e la produzione sono diminuiti sotto sµG, il che è in linea con la ridotta differenziazione dei fibroblasti. Abbiamo ulteriormente studiato i cambiamenti a livello trascrittomico utilizzando il sequenziamento dell’RNA. I risultati hanno dimostrato che sµG ha un effetto minore sui trascrittomi dei fibroblasti, mentre sµG innesca cambiamenti nel trascrittoma dei miofibroblasti.

 

Diversi geni e percorsi biologici trovati attraverso l’analisi del trascrittoma sono stati precedentemente segnalati per compromettere la differenziazione dei fibroblasti. Nel complesso, i nostri dati hanno indicato che la differenziazione dei fibroblasti, così come la produzione e il rimodellamento della matrice, sono compromessi nella coltura 3D in condizioni di sµG.

 

Ammonia Assay Kit

MET-5086 Cell Biolabs 100 assays 456 EUR

Irisin ELISA Kit

MET-5089 Cell Biolabs 96 assays 572 EUR

Adenosine Assay Kit

MET-5090 Cell Biolabs 100 assays 508 EUR

Inosine Assay Kit

MET-5092 Cell Biolabs 100 assays 508 EUR

Alanine Assay Kit

MET-5093 Cell Biolabs 200 assays 508 EUR

Phosphoprotein Purification Kit

AKR-106 Cell Biolabs 5 preps 485 EUR

GFP Quantitation Kit

AKR-120 Cell Biolabs 100 assays 577 EUR

?-Galactosidase Staining Kit

AKR-100 Cell Biolabs 1 kit 432 EUR

Phosphoprotein Purification Kit

AKR-105 Cell Biolabs 2 preps 299 EUR

GFP ELISA Kit

AKR-121 Cell Biolabs 96 assays 734 EUR

GFP ELISA Kit

AKR-121-5 Cell Biolabs 5 x 96 assays 3025 EUR

RFP ELISA Kit

AKR-122 Cell Biolabs 96 assays 734 EUR

Histamine Assay Kit

AKR-360 Cell Biolabs 96 assays 519 EUR

Urea Assay Kit

STA-382 Cell Biolabs 192 assays 635 EUR

Phosphatidylcholine Assay Kit

STA-600 Cell Biolabs 96 assays 519 EUR

Sphingomyelin Assay Kit

STA-601 Cell Biolabs 96 assays 519 EUR

Homocysteine ELISA Kit

STA-670 Cell Biolabs 96 assays 699 EUR

Glutamate Assay Kit

STA-674 Cell Biolabs 200 assays 514 EUR

Hydroxyproline Assay Kit

STA-675 Cell Biolabs 96 assays 514 EUR

Cholic Acid ELISA Kit

MET-5007 Cell Biolabs 96 assays 676 EUR

Chenodeoxycholic Acid ELISA Kit

MET-5008 Cell Biolabs 96 assays 676 EUR

Lipid Droplet Isolation Kit

MET-5011 Cell Biolabs 50 preps 415 EUR

Lactate Assay Kit (Colorimetric)

MET-5012 Cell Biolabs 100 assays 450 EUR

Lactate Assay Kit (Fluorometric)

MET-5013 Cell Biolabs 100 assays 450 EUR

NAD+/NADH Assay Kit

MET-5014 Cell Biolabs 100 assays 572 EUR

Soluble Collagen Assay Kit

MET-5016 Cell Biolabs 96 assays 537 EUR

BCG Albumin Assay Kit

MET-5017 Cell Biolabs 250 assays 415 EUR

 

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