Istituzione di PANDA – una nuova linea cellulare di adenocarcinoma duttale pancreatico umano con tecnologia di coltura cellulare 3D

Consumo di glucosio di tipi di cellule vascolari in coltura; verso l’ottimizzazione delle condizioni sperimentali

• Dopo 48 ore di incubazione, i terreni che contenevano glucosio basso sono stati ridotti a quasi 0 mg / dL, i terreni che contenevano glucosio alto sono rimasti significativamente più alti a ~ 275 mg / dL e i terreni che contenevano glucosio medio sono rimasti più vicini al range fisiologico.
• Il trattamento con AngII ha aumentato il consumo di glucosio in AF e VSMC ma non in EC. Nella fibrillazione atriale è stato osservato anche un aumento del tasso di acidificazione extracellulare da parte di AngII. Nella FA, l’induzione di AngII delle proteine bersaglio a 48 ore variava a seconda della concentrazione di glucosio utilizzata.
• In terreni a basso contenuto di glucosio l’induzione della proteina regolatrice del glucosio 78 o dell’esochinasi II era più alta, mentre l’induzione di VCAM-1 era più bassa. L’utilizzo di inibitori specifici suggerisce inoltre ruoli essenziali del recettore AT1 e della glicolisi nell’attivazione dei fibroblasti indotta da AngII.
• Nel complesso, il presente studio dimostra un alto rischio di condizioni ipo o iperglicemiche quando si utilizzano terreni standard a basso o alto livello di glucosio con le cellule vascolari. Inoltre, queste condizioni possono alterare significativamente i risultati sperimentali.
• La concentrazione di glucosio nel terreno deve essere monitorata durante qualsiasi esperimento di coltura e l’utilizzo del glucosio nel terreno medio è raccomandato per tutti i tipi di cellule vascolari.

Da oltre tre decenni, le cellule di mammifero sono l’ospite per eccellenza per la produzione di proteine ricombinanti a scopo terapeutico nell’uomo. A causa dell’alto costo dei mezzi e di altri materiali di consumo utilizzati per la crescita cellulare, inizialmente questa piattaforma di espressione era utilizzata solo per la produzione di proteine di importanza farmaceutica, compresi gli anticorpi.

Tuttavia, le grandi aziende biotecnologiche che hanno utilizzato questa piattaforma hanno continuato la ricerca per migliorarne la fattibilità tecnica ed economica. Il principale miglioramento qualitativo è stato ottenuto quando le singole cellule potevano essere coltivate in un mezzo liquido simile a colture di batteri e lieviti. Un’altra importante innovazione per la crescita di cellule in sospensione è stato il miglioramento dei terreni chimicamente definiti che non contengono macromolecole; erano più economici da coltivare come qualsiasi altro mezzo microbico.

Queste pietre miliari scientifiche hanno ridotto il costo della coltura cellulare di mammifero e il loro utilizzo per ottenere proteine per uso veterinario. La facilità di lavorare con colture cellulari di mammifero ha consentito l’uso di questa piattaforma di espressione per produrre ingredienti farmaceutici attivi per vaccini veterinari. In questo capitolo verrà descritto il protocollo per ottenere linee cellulari di mammifero ricombinanti.

Istituzione di un modello di tessuto simile al trofoblasto da cellule staminali pluripotenti umane in un sistema di coltura tridimensionale

Utilizzo di MVDA con bilance stechiometriche per ottimizzare le concentrazioni di aminoacidi nel terreno di coltura cellulare CHO chimicamente definito per migliorare le prestazioni di coltura