Introduzione: Le ulcere intrattabili possono portare all’amputazione. Per promuovere la guarigione delle ferite, i ricercatori hanno sviluppato una cultura della qualità e della quantità di cellule mononucleate del sangue periferico ex vivo priva di siero (MNC-QQc) come fonte per la terapia cellulare. Nei topi, suini e persino nell’uomo, la terapia cellulare con MNC-QQc secondo quanto riferito produce un’elevata efficacia rigenerativa.
Tuttavia, il meccanismo di guarigione delle ferite da parte delle cellule MNC-QQc rimane in gran parte sconosciuto. Quindi, utilizzando un modello di guarigione delle ferite in vitro, questo studio mirava a studiare le cellule MNC-QQc e il potenziale migratorio dei fibroblasti dermici.
Metodi: Dopo la separazione da un campione di sangue di 50 mL da individui sani, le cellule mononucleate sono state coltivate per 7 giorni in un sistema di espansione ex vivo senza siero con cinque diverse citochine (MNC -metodo QQc). Gli effetti delle cellule MNC-QQc sulla migrazione dei fibroblasti dermici umani sono stati osservati mediante test di scratch.
Un array di angiogenesi ha analizzato il surnatante delle cellule MNC-QQc per le proteine correlate alla guarigione delle ferite. Infine, la migrazione dei fibroblasti è stata confermata osservando le vie di trasduzione del segnale intracellulare tramite Western blot.
Risultati: La migrazione di fibroblasti co-coltivati con cellule MNC-QQc è aumentata dalla secrezione di matrice metallopeptidasi-9 (MMP9), come suggerito dall’array di angiogenesi. Inoltre, è aumentata la fosforilazione del trasduttore di segnale e dell’attivatore della trascrizione 3 (STAT3) nella co-coltura di cellule fibroblasti/MNC-QQc e nella coltura di fibroblasti con l’aggiunta di proteina MMP9 umana ricombinante.
Quando i fibroblasti sono stati coltivati con un inibitore di MMP9 o un inibitore di STAT3, sia la migrazione dei fibroblasti che la fosforilazione di STAT3 sono state significativamente soppresse.
Conclusioni: le cellule MNC-QQc promuovono la guarigione delle ferite mediante la secrezione di MMP9, che induce la migrazione dei fibroblasti attraverso la via di segnalazione STAT3.
Parole chiave: BM, Midollo osseo; BMMNC, cellule mononucleate del midollo osseo; Coltura cellulare; Terapia cellulare; DMEM, mezzo di Eagle modificato da Dulbecco; EPC, Cellule progenitrici endoteliali; FBS, siero fetale bovino; HRP, Perossidasi di rafano; MMP, metallopeptidasi di matrice; MMP9; MNC, cellula monocitaria; MNC-QQc; PB, Sangue periferico; PBMNC, cellule monociti del sangue periferico; PBS, soluzione salina tamponata con fosfato; QQc, Cultura della qualità e della quantità; SE, errore standard; VEGF, Fattore di crescita endoteliale vascolare; La guarigione delle ferite.
Il mutante lipopolisaccaride Re-LPS è uno strumento utile per rilevare la contaminazione da LPS nelle colture di cellule sinoviali reumatoidi
Introduzione: La contaminazione da lipopolisaccaridi (LPS) di proteine disponibili in commercio ha seriamente ostacolato la ricerca sul fibrinogeno citrullinato (cit-Fb) nelle cellule sinoviali reumatoidi (RSC)..
Metodi: le RSC ottenute da 4 pazienti con artrite reumatoide sottoposti a artroplastica totale del ginocchio sono state coltivate, stimolate con cit-Fb e sono stati misurati i livelli di espressione di citochine. Abbiamo quindi valutato la polimixina-B (PMB), l’inattivazione al calore e i mutanti LPS di tipo ruvido (R) per il rilevamento rapido della contaminazione da LPS.
Risultati: espressione indotta da cit-Fb di CXCL10 e IFNB in RSC tramite il recettore toll-like. Il PMB ha inibito l’espressione del gene CXCL10 mediata da cit-Fb ma non l’espressione della proteina indotta da 20 μg / ml di cit-Fb. L’inattivazione al calore non ha influenzato l’induzione di CXCL10 o IL-6 mediata da LPS; tuttavia, l’espressione di CXCL10 mediata da cit-Fb è stata inibita.
LPS wild-type da Escherichia coli (WT-LPS) induce fortemente l’espressione di CXCL10, ma l’induzione da parte di Ra-LPS era debole e l’induzione da parte di Rc- e Re-LPS era minima. La soppressione del re-LPS dell’induzione di CXCL10 mediata da WT-LPS nelle RSC e nei monociti del sangue periferico (PBM) era dose dipendente. Inoltre, Re-LPS ha completamente soppresso l’induzione di CXCL10 mediata da cit-Fb in RSC e PBM.
Conclusione: Per identificare facilmente la contaminazione da LPS durante gli esperimenti di routine, i nostri risultati suggeriscono che Re-LPS è uno strumento migliore per il rilevamento rapido della contaminazione da LPS rispetto al PMB e al trattamento termico.
Ingegneria di microniche di cellule staminali chimicamente definite mediante microfluidica compatibile con la crescita di iPSC in coltura 3D
Lo sviluppo di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) ha aperto opportunità senza precedenti per applicazioni biomediche, ma matrici derivate da animali mal definite producono cellule con un valore terapeutico limitato. Rimangono notevoli sfide nel miglioramento degli approcci alla coltura cellulare per creare le condizioni per un’espansione affidabile delle iPSC.
Qui riportiamo lo sviluppo di una micronicchia tridimensionale artificiale (3D) chimicamente definita per la crescita e l’espansione affidabile delle iPSC, costruita con polietilenglicole-co-policaprolattone degradabile e precursori di poliglicerolo dendritico funzionalizzati RGDfk secondo azide-alchino promosso da ceppo bioortogonale cicloaddizione mediante microfluidica basata su goccioline.
Questa micronicchia compatibile può consentire la robusta produzione di iPSC che mantengono un’elevata espressione di pluripotenza e un’eccellente vitalità senza rischi di trasferimento di patogeni o immunogeni. Questa tecnologia di micronicchia mostra grandi promesse nel consentire alle iPSC di raggiungere il loro pieno potenziale terapeutico.
L’attivazione di TO901317 di percorsi dipendenti da LXR mitiga la neurotossicità indotta dal peptide beta-amiloide negli scaffold di colture di cellule staminali neurali umane 3D e nei topi AD
La malattia di Alzheimer (AD) è la principale causa di neurodegenerazione in tutto il mondo ed è caratterizzata dall’accumulo di beta amiloide (Aβ) nel cervello, che è associato a perdita neuronale e deterioramento cognitivo. Si suggerisce che il recettore del fegato X (LXR), un recettore nucleare critico e il principale regolatore nel metabolismo e nell’infiammazione dei lipidi, svolga un ruolo protettivo contro la disfunzione mitocondriale osservata nell’AD.
- Nel nostro studio, il nostro consolidato modello di scaffold in gelatina 3D e un modello murino di AD ben caratterizzato in vivo (APP / PS1) sono stati utilizzati per indagare direttamente gli effetti molecolari, biochimici e comportamentali dell’esposizione delle cellule staminali neuronali ad Aβ per migliorare la comprensione del in eziologia in vivo dell’AD.
- Qui, le cellule staminali neurali umane (hNSCs) nel nostro modello 3D sono state esposte ad Aβ e avevano una vitalità cellulare significativamente ridotta, che era correlata con una diminuzione dell’mRNA e dell’espressione proteica di LXR, Bcl-2, CREB, PGC1α, NRF-1 e Tfam e aumento delle attività delle caspasi 3 e 9.
- Il cotrattamento con un agonista sintetico di LXR (TO901317) ha abrogato significativamente questi effetti mediati da Aβ nelle hNSC. Inoltre, il cotrattamento con TO901317 salva significativamente le hNSC dalle diminuzioni mediate da Aβ dei livelli di ATP e della massa mitocondriale, e ripristina significativamente i mitocondri frammentati indotti da Aβ a una morfologia quasi normale. Il cotrattamento TO901317 riduce anche gli aggregati tau nelle hNSC trattate con Aβ.
- È importante sottolineare che il trattamento con TO901317 allevia significativamente la compromissione della memoria, diminuisce gli aggregati di Aβ e aumenta l’attività del proteasoma nei topi APP/PS1; mentre, questi effetti sono stati bloccati dal cotrattamento con un antagonista LXR (GSK2033).
- Insieme, questi nuovi risultati migliorano la nostra comprensione meccanicistica del ruolo centrale di LXR nella disfunzione hNSC mediata da Aβ.
- Forniamo anche dati preclinici che svelano gli effetti protettivi dell’uso di un agonista LXR-dipendente, TO901317, per bloccare la tossicità osservata nelle hNSC esposte ad Aβ, che possono guidare le future strategie di trattamento per rallentare o prevenire la neurodegenerazione in alcuni pazienti con AD.
CELL CULTURE GRADE WATER |
|||
| IB42030 | IBI Scientific | 10L | 194.72 EUR |
Water, Plant Tissue Culture Grade |
|||
| 42300001-2 | Glycomatrix | 4 L | 63.89 EUR |
Water, Plant Tissue Culture Grade |
|||
| 42300001-1 | Glycomatrix | 1 L | 21.29 EUR |
Cell Culture Grade Water, Cell Culture Tested, Sterile |
|||
| CCM1081-500 | Bio Basic | 500 mL | 73.49 EUR |
Cell Culture Grade Water, Cell Culture Tested, Sterile |
|||
| CCM2081-1000 | Bio Basic | 1000 mL | 82.64 EUR |
500mL Water Cell Culture Grade - PK6 |
|||
| 25-055-CV | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 66.15 EUR |
1L Water Cell Culture Grade WFI - PK6 |
|||
| 25-055-CM | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 95.85 EUR |
Water for Cell Culture |
|||
| TBS5050 | Tribioscience | 500ml | 10 EUR |
Water, Biotechnology Grade |
|||
| 42300008-1 | Glycomatrix | 1 gal | 33.07 EUR |
Water, PCR Grade |
|||
| 42300013-1 | Glycomatrix | 100 mL | 21.5 EUR |
Water, PCR Grade |
|||
| 42300013-2 | Glycomatrix | 250 mL | 34.83 EUR |
Water, PCR Grade |
|||
| 42300013-3 | Glycomatrix | 500 mL | 60.1 EUR |
Water, PCR Grade |
|||
| 42300013-4 | Glycomatrix | 1 L | 82.47 EUR |
PCR-grade Water |
|||
| PCR-258-100 | Jena Bioscience GmbH | 100ml | 32.7 EUR |
PCR-grade Water |
|||
| PCR-258-1L | Jena Bioscience GmbH | 1L | 283.6 EUR |
PCR-grade Water |
|||
| PCR-258-500 | Jena Bioscience GmbH | 500ml | 45.8 EUR |
PCR-grade Water |
|||
| PCR-258L | Jena Bioscience GmbH | 50ml | 23.3 EUR |
PCR-grade Water |
|||
| PCR-258S | Jena Bioscience GmbH | 10 x 1,2ml | 20 EUR |
PCR GRADE WATER |
|||
| IB42300 | IBI Scientific | 1 VIAL | 7.4 EUR |
PCR GRADE WATER |
|||
| IB42301 | IBI Scientific | 20/PACK | 128.43 EUR |
PCR GRADE WATER |
|||
| IB42302 | IBI Scientific | 50/PACK | 318.01 EUR |
PCR GRADE WATER |
|||
| IB42303 | IBI Scientific | 100/PACK | 633.73 EUR |
Ultrafiltration Water, cell culture level |
|||
| PB180518-500mL | Elabscience Biotech | 500 mL | 15 EUR |
UltraPure Water, Cell Culture Tested |
|||
| W9200-045 | GenDepot | 450ml | 96 EUR |
Ultrafiltration Water, cell culture level |
|||
| PB180518 | Elabscience Biotech | 500mL | 15 EUR |
Apotransferrin tissue culture grade |
|||
| 30-AA15TC | Fitzgerald | 100 mg | 100 EUR |
Hepes Cell Culture Grade |
|||
| AK3268-0250 | Akron Biotech | 250g | Ask for price |
Hepes Cell Culture Grade |
|||
| AK3268-0500 | Akron Biotech | 500g | Ask for price |
Hepes Cell Culture Grade |
|||
| AK3268-1000 | Akron Biotech | 1kg | Ask for price |