Rilevamento diretto del coronavirus felino con tre test immunocromatografici rapidi basati sull’antigene e PCR in tempo reale nei rifugi per gatti

Effetto dell’inattivazione termica sulla rilevazione della sindrome respiratoria acuta grave – coronavirus-2 (SARS-CoV-2) con   reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in   tempo reale (rRT-    PCR   ): evidenza da uno studio in Etiopia

La malattia da coronavirus 2019 (COVID-19) è di grande importanza per la salute pubblica e il suo campione dovrebbe essere maneggiato in sicurezza a causa delle preoccupazioni sulla possibile trasmissione agli operatori sanitari. L’inattivazione termica del campione prima dell’isolamento dell’acido nucleico può consentire processi di analisi sicuri. Pertanto, è importante valutare l’effetto dell’inattivazione del calore sul rilevamento di SARS-CoV-2 RT-PCR in condizioni di risorse limitate.
Uno studio sperimentale è stato condotto presso l’Ethiopian Public Health Institute (EPHI) dal 25 settembre al 15 ottobre 2020. Sono stati raccolti un totale di 188 tamponi orofaringei da casi sospetti di COVID-19 riferiti a EPHI per il test SARS COV-2. 
Un lotto del campione è stato inattivato a 56°C per 30 minuti e l’altro   lotto è stato conservato a 4°C per un periodo di tempo simile. L’estrazione e il rilevamento dell’RNA sono stati eseguiti utilizzando i protocolli del kit DAAN Gene   . Abbott m2000 RT-PCR è stato utilizzato per l’amplificazione e il rilevamento. L’analisi dei dati è stata eseguita utilizzando SPSS versione 23.0; I test di correlazione del chi quadrato e di Pearson sono stati utilizzati per l’analisi qualitativa e semiquantitativa. Un valore p <0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
Di tutti i 188 campioni, 119 (63,3%) erano positivi e 69 (36,7%) negativi nel gruppo non inattivato. Al contrario, 115 (61,2%) campioni erano positivi e 73 (38,8) negativi nel lotto di campioni inattivati ​​al calore. L’indice di positività tra i gruppi non ha mostrato differenze statisticamente significative (p> 0,05). La differenza media nel valore di soglia del ciclo (Ct) tra i due   gruppi del gene ORF1a / b e del gene N era 0,042 (IC 95% – 0,247-0,331; t = 0,28; p = 0,774) e 0,38 (IC 95% 0,097-0,682; t = 2,638; p = 0,010).
L’inattivazione termica a 56°C per 30 min non ha influito sulla rilevazione qualitativa di SARS-CoV-2 rRT-PCR. Tuttavia, la scoperta ha mostrato che c’era un aumento statisticamente significativo del valore Ct dopo l’inattivazione termica rispetto ai campioni non trattati. Pertanto, i risultati falsi negativi per campioni con un valore Ct elevato (Ct> 35) si sono rivelati una sfida per questo protocollo. Pertanto, dovrebbero essere studiati metodi alternativi di inattivazione e considerare ulteriori ricerche.

DirectDetect SARS-CoV-2 Direct RT –   PCR in   tempo  reale    utilizzando i campioni dei pazienti

Il COVID-19 è una malattia infettiva che ha causato una pandemia globale che colpisce persone in tutto il mondo. Poiché il rilevamento delle malattie e l’introduzione dei vaccini continuano, sono ancora necessari strumenti diagnostici efficaci per soddisfare le esigenze di test continui. Questo studio preliminare ha valutato un nuovo test diagnostico SARS-CoV-2 chiamato DirectDetect SARS-CoV-2 Real Time Direct Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) basato su una   dimensione del campione limitata di 24 campioni di respiro con 14 SARS-CoV – 2 -pazienti positivi. Il test è superiore ad altri test disponibili in commercio in quanto non richiede il mezzo di trasporto del virus o l’estrazione dell’RNA virale prima dell’amplificazione e del rilevamento dell’acido nucleico.
  • Questa capacità trasforma ore di tempo di preparazione del campione in una procedura che richiede minuti, eliminando la necessità di molti reagenti costosi che possono essere difficili da ottenere durante il picco nel test dell’acido nucleico durante una pandemia.
  • I risultati mostrano una concordanza positiva del   94,7, 100 e 94,7% tra tamponi asciutti con campioni, campioni trattati e non trattati testati con DirectDetect SARS-CoV-2   RT-PCR diretta in tempo reale rispetto ai test utilizzati in laboratorio clinico, rispettivamente.
  • I risultati indicano che DirectDetect può essere utilizzato per molti diversi tipi di campioni riducendo il numero di reagenti e il tempo necessario per la diagnosi.
  • Sebbene questo studio mostri risultati promettenti utilizzando i risultati DirectDetect, è necessaria un’ulteriore convalida di questo test con un set più ampio di campioni per valutare le prestazioni effettive di questo test.
  • Il rilevamento tempestivo dei fattori eziologici è importante per il successo del trattamento di un ascesso ileopsoas (IPA). Lo scopo di questo studio era di testare l’utilità clinica della reazione a catena della polimerasi (PCR) in tempo reale che prende di mira il   gene mecA  per gli stafilococchi meticillino-resistenti (MRS) e il gene 16S rRNA per i pan-batteri. Il nostro studio diagnostico retrospettivo ha incluso 22 pazienti che mostravano IPA e quattro pazienti con aree non infettive del tumore ileopsoas sottoposti a tomografia computerizzata   o biopsia ecografica e/o chirurgia.
I sintomi clinici, i dati sierici, l’analisi di imaging e la coltura microbiologica dei tessuti sono stati utilizzati per diagnosticare l’IPA. L’accuratezza diagnostica della PCR in tempo reale è stata determinata sulla base della diagnosi dei risultati dell’IPA e della coltura microbica. La coltura microbica è risultata positiva per 12 casi di IPA, di cui 2 infezioni da MRSA. Dei 12 IPA positivi in ​​coltura, 16S rRNA-PCR era positivo in 12 e MRS-PCR in due. Dei 10 casi di IPA negativi alla coltura, inclusi 3 casi di tubercolosi, 16S   rRNA-PCR era positivo in 8 e MRS-PCR era positivo in 2. Nei pazienti con massa ileopsoas non infettiva, né 16S rRNA né MRS-PCR hanno rilevato un’infezione batterica . GOTTA.
Sensibilità, specificità, valori predittivi positivi e negativi di 16S rRNA-PCR nella diagnosi di IPA erano rispettivamente 0,91, 1,00, 1,00 e 0,67, mentre quelli per la diagnosi di infezione da MRS mediante MRS-PCR erano 1,00, 0,92, 1,00 , e 0,50 rispettivamente. La PCR in tempo reale mirata al DNA batterico può rilevare il DNA batterico nei casi negativi alla coltura e fornire una migliore rilevabilità dell’infezione da MRS nei pazienti IPA.

Test PCR  quantitativi   in ​​tempo  reale   per     la diagnosi simultanea del virus della laringotracheite infettiva, del virus della malattia di Newcastle e del metapneumovirus aviario nel pollame

La malattia di Newcastle (ND), la laringotracheite infettiva (ILT) e il metapneumovirus aviario (aMPV) possono essere tutti simili, il che rende fondamentale una rapida differenziazione. Qui abbiamo adattato i test diagnostici molecolari preesistenti per NDV e ILTV e sviluppato nuovi test per aMPV A e B da utilizzare in   condizioni di termociclaggio sincronizzato. Tutti i test sono stati eseguiti in modo equivalente con linearità nell’intervallo dinamico di 5 log   10   , limite di rilevamento ripetibile (R²> 0,99) di ≥ 10 copie target ed efficienze di amplificazione comprese tra 86,8% e 98,2%. L’uso di campioni biologici per NDV e ILTV ha mostrato una specificità del 100%. Condizioni di amplificazione identiche semplificheranno le procedure di rilevamento nei laboratori diagnostici.
Lo scopo di questo studio era il rilevamento diretto del coronavirus felino mediante PCR in tempo reale e tre diversi test di immunocromatografia rapida (RIM) per rilevare gli antigeni nei campioni felini dei rifugi. L’utilità dei test RIM è stata confrontata in base alla sensibilità e specificità calcolate per ciascuno dei test RIM. Sono stati testati  settanta campioni fecali di gatti di rifugio in quarantena   . Dei 70 campioni analizzati mediante PCR in tempo reale, 44 (62,9%) erano positivi.

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Human Kinase Library (I, II, III and IV)

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Human Liver Cancer Primer Library

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Human Ligand Gated Ion Channels Primer Library

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Human DNA Repair Primer Library I

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Human Drug Transporter I Primer Library

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Human Drug Detoxication I

HDTX-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Human Drug Detoxication II

HDTX-II Real Time Primers 1 set 774 EUR

Human MAP Kinase Signaling Library

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Human Myeloid Derived Suppressor Cell Primer Library

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Human Melanoma Primer Library

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Human Necroptosis Primer Library

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Human NFKappaB Primer Library

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Human NK Cell Mediated Toxicity Primer Library

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Human Nitric Oxide Signaling Primer Library

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Human Notch Signaling Pathway

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Human Neurotransmitter Signaling Primer Library

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Human Chromatin Regulation Primer Library

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Human Oncogene circRNA Library

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Mouse T-Cell Receptor Signaling Primer Library

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Mouse Hippo Signaling Primer Library

MHPO-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Hypoxia Signaling Primer Library

MHYP-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Oncogene Primer Library

MONC-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Oxidative Stress Primer Library

MOSL-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Apoptosis Primer Library

MPA-I Real Time Primers 1 set 540 EUR

Mouse Notch Signaling Primer Library

MNOT-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Neurotransmitter Signaling Primer Library

MNTS-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Integrin Signaling Primer Library

MINT-I Real Time Primers 1 set 891.6 EUR

Mouse Jak/Stat Signaling Primer Library

MJAK-I Real Time Primers 1 set 774 EUR

Mouse MAP Kinase Signaling Primer Library

MMAP-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Myeloid Derived Suppressor Cell Primer Library

MMDSC-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse NFKappaB Primer Library

MNFKB-I Real Time Primers 1 set 540 EUR

Mouse Adipogenesis Primer Library

MADG-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse PI3K-AKT Signaling Primer Library

MAKT-I Real Time Primers 1 set 657.6 EUR

Mouse Angiogenesis Primer Library

MAPL-I Real Time Primers 1 set 540 EUR

Mouse Autophagy Primer Library

MATPL-I Real Time Primers 1 set 540 EUR
Significativamente più gatti (   p    <0,05) sono risultati positivi che negativi. Né l’età né il sesso dei gatti hanno giocato un ruolo significativo (   p    > 0,05) nell’escrezione virale. La sensibilità dei test RIM è risultata bassa (<35%; test RIM A e C) a un livello soddisfacente (> 50%, test RIM B). Il numero di particelle virali determinato dall’analisi RT-PCR in tempo reale non era significativamente correlato ai risultati rilevati in nessuno dei saggi RIM (   p    > 0,05). I risultati di questo studio indicano che l’uso dei test antigenici rapidi RIM nello screening di routine per lo stato di eliminazione di FCoV nei gatti da rifugio è limitato a causa dell’elevato numero di risultati falsi negativi.

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